بیان سازه دکامر لومازین سنتاز با منشأ ‏بروسلایی در سیستم بیانی پروکاریوتی

Authors

  • بهجت مجیدی دکتری رشته بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام نور، ‏تهران، ایران
  • رضا حاچی حسینی استاد بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام ‏نور، تهران، ایران
  • شهریار سعیدیان استادیار بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه ‏پیام نور، تهران، ایران
  • محسن فتحی نجفی استادیار، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مؤسسه تحقیقات ‏واکسن و سرم‌سازی رازی، مشهد
Abstract:

لومازین سنتاز بروسلایی، آنزیم دخیل در بیوسنتز ریبوفلاوین، مرکب از 10 زیرواحد مشابه می‌باشد که به‌صورت کپسیدی تجمع می یابند. با توجه به کاربردهای وسیع لومازین سنتازها در زمینه‌های بیولوژی، تولید لومازین سنتاز در مقیاس بالا و خالص‌سازی کارآمد آن ضروری می‌نماید. در مطالعه حاضر، ساختار اولیه لومازین سنتاز بروسلا ملی‌تنسیس از پایگاه داده NCBI دریافت گردید. توالی لومازین سنتاز ابتدا با استفاده از واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز تکثیر گردید و سپس کلون و بیان گردید. بیان سازه با استفاده از پلازمید بیانی pET28a و در باکتری BL21 DE3 انجام گردید. برای حذف بقایای دیواره باکتری و خالص‌سازی پروتئین، از روش‌های رسوب‌دهی با آمونیوم سولفات و تکنیک‌های کروماتوگرافی تعویض یونی استفاده گردید. از آزمون‌های الیزا و وسترن بلات جهت تأیید بیان و مانیتورینگ مراحل استفاده گردید. خالص‌سازی لومازین سنتاز با استفاده از روش کروماتوگرافی با استفاده از سفادکس دی اتیل آمینو اتیل DEAE منجر به حصول باند یگانه در الکتروفورز با ژل پلی اکریلامید (SDS-PAGE) گردید. نتایج این بررسی نشان داد که روش‌های بهینه‌سازی بیان و خالص‌سازی مورد استفاده در این تحقیق، می‌تواند در تولید لومازین سنتاز نوترکیب بروسلایی خالص و در مقیاس بالا به‌عنوان یک محصول نوترکیب ارزشمند در تحقیقات واکسن استفاده گردد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

جداسازی، همسانه‌سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta  بود. Rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می‌رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و ر...

full text

ساخت سازه ی بیانی آنزیم cel ii درسیستم بیان پروکاریوتی

یک جهش به عنوان تغییر یا تعویض ارثی در ماده ژنتیکی تعریف می شود. با توجه به اهمیت شناسایی جهش ها در طول سال های اخیر دانشمندان به راهکارهایی برای شناسایی آن ها پرداختند. تکنیک هضم آنزیمی dna هترودوپلکس یکی از متداول ترین تکنیک های مورد استفاده در شناسایی جهش های نقطه ای در قطعات ژنومی است. در طی سال های اخیر آنزیم های خانواده ی cel مهمترین نوکلئازهای مورد استفاده در این زمینه هستند که به صورت ک...

15 صفحه اول

جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(scf)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(hscs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان scf در میزبان بیانیrosetta  بود. rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و رو...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...

full text

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

full text

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 9  issue 1

pages  81- 87

publication date 2020-08-22

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023